青霉素類獸藥的作用機理是干擾細菌細胞壁的合成，而細胞壁的合成發生于細菌的繁殖期，所以青霉素類獸藥對繁殖期的細菌具有殺滅作用，又稱此類獸藥為繁殖期殺菌藥。青霉素類獸藥在臨床上使用非常廣泛，但如果使用不當，不僅起不到治療作用，而且會延誤病情，甚至造成不必要的經濟損失。使用青霉素類獸藥應注意以下幾點：
　　1.嚴格掌握用藥范圍。青霉素G對大多數革蘭氏陽性菌引起的疾病，如呼吸系統感染、豬丹毒、炭疽、敗血癥等有很好的療效，對各種螺旋體和放線菌都有強大的抗菌作用；苯唑青霉素、雙氯青霉素、芐星青霉素則對耐青霉素G的金黃色葡萄球菌所致的呼吸道感染、乳腺炎、創傷感染及敗血癥等有可靠的療效。

　　2.選擇適宜的給藥途徑。絕大部分青霉素類獸藥對酸不穩定，內服易被胃酸和消化酶所破壞，故內服效果差或無效。青霉素類獸藥最適宜的給藥途徑是進行肌肉注射，肌注后吸收快而完全，療效確切。

　　3.注意過敏反應。青霉素類獸藥用于動物機體一般無不良反應，但對個別家畜偶見有過敏反應，嚴重者可產生過敏性休克。易過敏家畜中以馬、騾、豬、犬等多見，注射后不久出現流汗、興奮不安、肌肉震顫、心跳加快、呼吸困難、站立不穩、抽搐等癥狀。因此，在用藥過程中應注意觀察，如出現過敏反應，應立即停止用藥，同時，用腎上腺素或地塞米松進行搶救。

　　4.青霉素鉀鹽不宜靜脈注射，宜進行肌肉注射。在使用青霉素鉀鹽時還應注意動物的血鉀變化，一般禁止大量使用，特別對高血鉀患畜禁用。

　　5.青霉素類獸藥不宜空腹注射，以免患畜因血糖較低而引起昏厥。

　　6.不應隨意加大劑量。大劑量或超大劑量使用青霉素類獸藥，可干擾凝血機制而造成出血或引起中樞神經系統中毒，引起動物抽搐，大小便失禁，甚至癱瘓等癥狀。也可使耐藥菌迅速誘導產生分解青霉素的β-內酰胺酶。所以在獸醫臨床上應嚴格掌握正確的使用方法和劑量。