四環素類藥物酶聯免疫檢測試劑盒質量標準

來源：  發布日期：2011-09-03  發布者：曉天  共閱1611次

本品系用四環素類藥物檢測抗原、兔抗四環素類藥物特異性抗體和酶標羊抗兔IgG的抗體及其他試劑制成。用于檢測牛奶和動物組織中四環素類藥物殘留量。

【物理性狀】 試劑盒外觀完整，內裝物品齊全?？贵w、標準溶液、酶結合物、緩沖液1、緩沖液2、緩沖液3和緩沖液4為無色透明液體，底物為淺黃色溶液。

【靈敏度測定】 50%抑制濃度（即0濃度標準溶液的吸光度值50%處所對應的四環素類藥物濃度）范圍應在2.3?g/L ~3.7?g/L 之間。

【特異性測定】 分別測定空白樣品和100?g/L（kg）四環素添加組織樣品，陰性樣品測定值應在10?g/L（kg）以下，添加藥物樣品回收率應在40%-120%之間。

【精密度測定】 20個微孔的3?g/L標準溶液的光吸收度值變異系數(%)應不高于20%（n=20）。

【適用范圍】 用于檢測牛奶、雞、魚、豬和牛組織中四環素、金霉素、土霉素和多西環素殘留量。

【用法及結果判定】

1．溶液的配制

1.1 20mmol/L草酸甲醇溶液：稱取草酸1.8克，加甲醇900mL溶解，稀釋至1000mL。

1.2 MCI緩沖液：稱取檸檬酸12.9g，磷酸氫二鈉10.9g，已二胺四乙酸二鈉37.2g，加水900mL溶解，調pH至 3.8，稀釋至1000mL。

1.3 1mol/L氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉40g溶于1000mL水中，混勻。

1.4 3%三氯乙酸溶液：稱取三氯乙酸30g溶于1000mL水中，混勻。

1.5 稀釋標準溶液：分別吸取各濃度的標準溶液各50?L，加入450?L緩沖液1，混勻。

1.6 洗液：將緩沖液2稀釋10倍，洗板及稀釋抗體和酶結合物時使用。

1.7 稀釋抗體濃縮液：用洗液將抗體濃縮液10倍稀釋（做整塊板時，取抗體濃縮液0.5mL，加4.5mL洗液，混勻）。

1.8 稀釋酶結合物濃縮液：用洗液將酶結合物濃縮液10倍稀釋（做整塊板時，取酶結合物濃縮液1mL，加9mL洗液，混勻）。

1.9 底物溶液的配制：用緩沖液3稀釋底物10倍，根據用量現配現用，底物溶液變藍時禁止使用。

2. 樣品前處理

2.1 牛奶：新鮮的牛奶或凍融的牛奶用緩沖液1稀釋10倍作為試樣溶液供酶聯免疫法測定（50?L牛奶樣品，加450?L緩沖液1）。

2.2 組織提取方法1（雞肌肉）：

稱取勻質（以10000r/min勻漿1min）的肌肉2.0g，加入MCI緩沖液8.0mL，于漩渦振蕩器上混勻，顛倒振蕩30min，以10000r/min離心10min，取上清液備用（如上清液仍然渾濁，可用濾紙過濾）。

依次用無水甲醇3mL、水2mL活化C18固相萃取柱。取備用液5.0mL過柱，再用水2mL淋洗萃取柱，將萃取柱擠干。用20mmol/L草酸甲醇溶液1.0mL洗脫，收集洗脫液，擠干萃取柱。將洗脫液搖勻，用緩沖液1稀釋10倍作為試樣溶液供酶聯免疫法測定（吸取洗脫液50?L，加入450?L緩沖液1，搖勻）。

2.3 組織提取方法2（魚肉、豬、牛組織）：

稱取勻質（以10000r/min的速度勻漿1min）的組織1.0g，加入3%三氯乙酸（魚肉、豬肉和牛肉4mL，豬肝和牛肝8mL），旋渦混勻，顛倒振蕩20min，以10000r/min離心10min，取上清液200?L于1.5mL離心管中，加入1mol/L氫氧化鈉溶液20?L，混勻，加入緩沖液1 780?L混勻，以8000 r/min離心5min，上清液備用。

3.檢測步驟

3.1 使用前將試劑盒恢復室溫（19℃~37℃）。

3.2 剪開錫箔袋，取所需微孔板條的數量，插入框架。

3.3 依次向微孔中加入標準溶液或試樣溶液50?L，稀釋的抗體50?L，在微型震蕩器上充分混勻后，用封口膜封好，室溫孵育1h。

3.4 倒出孔內液體，將酶聯板倒置在吸水紙上拍打，使孔內沒有殘余液體。加洗液250?L于微孔內，稍后倒出孔內液體，再將酶聯板倒置在吸水紙上拍打，如此重復操作洗板三次。

3.5 加入稀釋的酶結合物100?L，室溫孵育30min。

3.6 重復步驟4。

3.7 加底物溶液100?L，室溫避光孵育5~15min。

3.8 每孔加終止液100?L，于450nm波長處測定吸光度值，60min內讀數。

4. 結果判定




按下式計算百分吸光度值：

B—為標準溶液或樣品溶液的平均吸光度值。

B0—為0濃度的標準溶液平均吸光度值。

以標準溶液中四環素濃度的對數為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線，從標準曲線上計算出試樣溶液中四環素類藥物的濃度。

【注意事項】

1．實驗操作應在19~37℃的溫度下操作。

2．0標準液吸光度值大于或等于0.6。

【貯藏條件和保存期】 在2~8℃下避光保存，保存期為6個月。

【規格】 96孔/盒。每個試劑盒含96孔板一塊，四環素類藥物系列標準溶液（1mL/瓶）稀釋后濃度分別 （0，0.3?g/L， 1?g/L，3?g/L，10?g/L，30?g/L），酶結合物濃縮液（1.5mL），抗體濃縮液(1mL)，底物溶液(1.5mL)，緩沖液1(25mL)，緩沖液2(25mL)， 緩沖液3(15mL)，蓋板膜1張。

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