磺胺二甲嘧啶酶聯免疫試劑盒質量標準

來源：  發布日期：2011-09-03  發布者：曉天  共閱1546次

本品系用磺胺二甲嘧啶(SM2)偶聯蛋白的抗原、磺胺二甲嘧啶單克隆抗體和酶標記羊抗鼠及其它試劑制成。用于定量、定性檢測豬組織、雞組織、蝦、雞蛋、蜂蜜中磺胺二甲嘧啶的殘留量。

【物理性狀】試劑盒外觀完整，內裝試劑齊全。包被抗原的酶聯板透明干燥且用真空包裝?；前范奏奏た贵w工作液、底物溶液、終止液、標準品溶液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液為透明溶液，酶標記物為淺黃色溶液，試劑無菌檢驗均應合格。

【靈敏度測定】 取已包被好的酶標板12孔，每兩孔分別加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、81?g/L標準溶液各50?L，再加入SM2抗體50?L，37℃反應30min，取出洗板5次，拍干，加入100?L酶標二抗，37℃反應30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50?L，避光37℃反應15min，用50uL終止液終止反應，置450nm波長處測定吸光度值。每一濃度標準溶液吸光度值（B）平均值除以第一個標準（0標準）吸光度值（B0）的平均值再乘以100％，即百分吸光度值。以SM2濃度(?g/L)的自然對數值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。

IC50（即0濃度標準溶液的吸光度值50%處所對應的SM2濃度）范圍應在1.4?g/L～3.8?g/L之間。

【特異性測定】 取已包被好的酶標板18孔，每兩孔分別加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、 81?g/L標準溶液和陰性樣本提取液、10?g/kg和20?g/kg磺胺二甲嘧啶添加的陽性樣本提取液各50?L，再加入SM2抗體50?L，37℃反應30min，取出洗板5次，拍干，加入100?L酶標二抗，37℃反應30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50?L，避光37℃反應15min，用50?L終止液終止反應，置450nm波長處測定吸光度值。每一濃度標準溶液吸光度值（B）平均值除以第一個標準（零標準）吸光度值（B0）的平均值再乘以100，即百分吸光度值。以SM2濃度(?g/L)的自然對數為X軸，百分吸光度為Y軸，繪制標準曲線圖。從標準曲線中查出陰性樣品和10?g/kg和20?g/kg SM2添加的樣品的測定濃度。

陰性樣品測定值應在2.0?g/kg以下，10?g/kg 和20?g/kg 磺胺二甲嘧啶添加組織樣品的回收率在55.0％~120.0％之間。

【精密度測定】 取已包被好的酶標板32孔，每兩孔分別加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、81?g/L標準溶液各50?L，其它20孔加入9?g/L的標準溶液50?L，再加入SM2抗體50?L，37℃反應30min，取出洗板5次，拍干，加入100?L酶標二抗，37℃反應30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50?L，避光37℃反應15min，用50?L終止液終止反應，置450nm波長處測定吸光度值。

20個微孔的9?g/L標準溶液的吸光度值變異系數(%)應≤25%（n=20）。

【適用范圍】 用于定量、定性檢測豬和雞組織（肌肉、肝臟等）、蝦、雞蛋、蜂蜜中磺胺二甲嘧啶的殘留量。

【用法和結果判定】

1.1 稀釋復溶液：將2X濃縮復溶液搖勻，用水以1：2比例稀釋，臨用前配制。

1.2 稀釋洗滌液：將20X濃縮洗滌液搖勻，用水以1：20比例稀釋，臨用前配制。

2．樣品前處理

2.1 豬和雞組織（肌肉、肝臟）樣本處理方法

2.1.1 取適量組織用勻漿機10000r/min勻漿1 min，稱取5±0.05g勻漿物置離心管中，加入15mL乙腈水溶液（84 v +16 v）混合，劇烈振蕩10min。于15℃，3000g以上速度離心10min；

2.1.2 取3mL上清液，加入2mL水和5mL乙酸乙酯，混合振蕩10min，15℃，3000g以上速度離心5min；

2.1.3 將上層液移另一管中用氮氣吹干（或雞心瓶中，50℃減壓蒸干）；

2.1.4 用1mL稀釋好的復溶液充分溶解干燥的殘留物，加入異辛烷1mL振蕩2min。15℃，3000g，離心5min，除去上層液；

2.1.5 取50?L水相進行分析。

2.2 雞蛋和蝦樣本處理方法同豬、雞組織樣本處理方法。

2.3 蜂蜜樣本處理方法

2.3.1 取1g蜂蜜，放入離心管中，用2mL稀釋好的復溶液溶解；

2.3.2 加入8mL乙酸乙酯上下劇烈震蕩10min；

2.3.3 室溫3000g以上速度離心10min；

2.3.4 移取1mL上層乙酸乙酯（相當于0.1g樣品）到另一離心管中，50~60℃氮氣流下蒸干；

2.3.5 殘留物用稀釋后的0.5mL復溶液溶解；

2.3.6 取50 ?L水相進行分析。

2.　 檢測步驟

2.1　 將所需試劑從冷藏環境中取出，置室溫（20~24℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2.2　 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔密封放入自封袋，保存于2~8℃。

2.3　 編號：將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品均需做

2孔。

2.4　 每孔加標準品或樣本50μL，然后加抗體工作液50μL，用蓋板膜蓋板，37℃環境中反應30min。

2.5　 取出酶標板甩出孔內液體后用洗滌液按每孔250μL,洗板4~5次，每次浸泡10s，用吸水紙拍干。

2.6　 加酶標二抗工作液，每孔100μL，用蓋板膜蓋板后置37℃環境中反應30min。取出按2.6操作

2.7　 顯色：每孔加入顯色劑A液50μL，再加B液50μL，輕輕振蕩混勻，37℃環境中避光顯色15min。

2.8　 測定：每孔加入終止液50μL，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測），測定吸光度值（OD值）。

3. 結果判定

所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。 百分吸光度值（%）＝
B
×100%

B0



B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0?g/L標準溶液的平均吸光度值

以標準品百分吸光率為縱坐標，以磺胺二甲嘧啶標準品濃度的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中磺胺二甲嘧啶實際濃度。

若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。

【儲藏條件和保存期】 試劑盒應在2~8℃保存，保存期為6個月。

【規格】 每個試劑盒含96孔板一塊；SM2標準品1mL/瓶（0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、 81?g/L）；SM2抗體工作液1瓶，7mL；酶標二抗工作液1瓶，12mL；20X濃縮洗滌液1瓶，40mL；2X濃縮復溶液1瓶，50 mL；底物液A液1瓶，7mL；底物液B液1瓶，7mL；終止液1瓶，7mL；高濃度標準品（1?g/mL）1瓶，1mL；蓋板膜1張；自封袋1個；說明書1份；質量報告1份。

【注意事項】

1、試劑盒在緩沖液配制和液體分裝上要做到無菌，防止試劑變質。

2、試劑盒標準品應經過嚴格配制后方可用于試劑盒中。

3、添加回收用的高濃度標準品需經過試劑盒自身標準驗證，合格后方可用于特異性和準確度監控用。

4、格按照質量標準所述用法和結果判定內容進行試劑盒質量控制。

5、在試劑盒老化實驗中出現有不合格現象，則視該批試劑盒為不合格。

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