超微粉碎對黃連解毒散、白頭翁湯體外抑菌效果的影響

來源：康星藥業集團  發布日期：2011-03-22  發布者：曉天  共閱977次

要：分別采用超微粉碎技術和普通粉碎技術將黃連解毒散、白頭翁湯制成超細微粉和細粉，應用管碟法進行體外抑菌試驗，比較超微粉碎對黃連解毒散、白頭翁湯體外抑菌效果的影響。結果表明黃連解毒散、白頭翁湯超細微粉比細粉水提取液和醇提取液的抑菌圈均大，且差異顯著(P<0.05)，說明超微粉碎可明顯提高中藥方劑的體外抑菌效果。

　　關鍵詞：黃連解毒散;白頭翁湯;超微粉碎技術;體外抑菌

　　中藥超微粉是利用國際領先粉體工程加工工藝對中藥實施細胞破壁加工而成的粉劑[1]。經高速粉碎等工藝加工，一般能將物料顆粒粉碎至500目左右[2]，這樣不僅破壞細胞之間的胞間層，而且將細胞打碎，其粉碎粉末細度為5～10μm，細胞完全破壁，藥材中的有效成分充分釋放出來。因此，中藥超細微粉能最大限度保留藥物的生物活性成分，提高中藥有效成分的溶出、吸收、利用，提高生物利用度和藥效，同時降低用藥量、節約成本[3]。

　　黃連解毒湯由黃連、黃芩、黃柏和桅子組成。白頭翁湯由白頭翁，黃柏，黃連，秦皮組成。兩方都為清熱解毒代表方，主治三焦熱盛證，瘡黃腫毒，熱毒痢疾[4,5]。在獸醫臨床上，廣泛應用于敗血癥、膿毒血癥、細菌性痢疾等多種急性炎癥[5,6]。本項目選擇黃連解毒散和白頭翁湯作為研究對象，采用超微粉碎技術和普通粉碎技術加工黃連解毒散、白頭翁湯復方，對兩種方法制成的粉末進行體外抑菌效果的研究。通過試驗，了解超微粉碎技術對黃連解毒散、白頭翁湯有效成分體外抑菌效果的影響，為該技術在中獸藥制劑領域中的應用提供科學依據。

　　1 材料與方法

　　1.1 試驗材料

　　黃連、黃柏、黃芩、梔子、白頭翁、秦皮(購于鄭州中藥有限公司)。

　　黃連解毒散與白頭翁湯按(中華人民共和國獸藥典2005版第二部)規定配比而成。

　　黃連解毒散、白頭翁湯超細微粉由開封同創超細粉體技術開發工程中心出品的振動式超微粉碎機加工至300目，黃連解毒散、白頭翁湯細粉經普通粉碎機粉碎至65目，試驗前40℃減壓干燥至恒重。

　　1.1.1 溫水浸泡提取液的制備

　　稱取黃連解毒散、白頭翁湯細粉及超細微粉各50g，加10倍藥量的蒸餾水，40℃水浴浸泡50min，10000r/min離心10min取上清液，40℃減壓蒸發濃縮，濃縮液再離心，上清液用50mL容量瓶定容至50mL，即得1g/mL的溫水浸泡提取液，0.22μm濾菌器過濾除菌，4℃保存，備用。

　　1.1.2 醇提取液的制備

　　稱取黃連解毒散細粉及超細微粉各50g，加入70%乙醇500mL，40℃超聲提取10min，靜置5分鐘，過濾，水浴加熱蒸餾乙醇，濃縮液10000r/min離心10min，上清液用50mL容量瓶定容至50mL，即得1g/mL的醇提取液，用0.22μm濾菌器過濾除菌，4℃保存，備用。

　　1.2 試驗器材

　　超凈工作臺，隔水式恒溫培養箱，9cm玻璃平皿，牛津杯，冰箱，L棒，20μL～200μL微量移液器。

　　1.3 試驗菌株與培養基

　　1.3.1 菌株

　　大腸桿菌(ATCC25922)，金黃色葡萄菌(ATCC25923)(購于中國醫學微生物保藏中心)。臨床分離菌株：大腸桿菌LYG(江蘇連云港)，大腸桿菌XX(河南新鄉)，大腸桿菌NC(鄭州南曹)，沙門氏菌S-XM(鄭州新密)。

　　1.3.2 培養基

　　MH(A)瓊脂培養基，MH(B)肉湯培養基(北京奧博星生物技術有限公司)。

　　1.4 試驗方法

　　1.4.1 菌液的制備

　　菌懸液的制備：將細菌菌株接種于MH(B)肉湯培養基中，置37℃搖床中振搖培養過夜。通過麥氏標準比濁法對細菌菌液進行比濁計數，使用紫外可見分光光度儀在625nm波長處測定細菌菌液、麥氏標準管(0.5號管)的吸光度，用滅菌生理鹽水調整細菌菌液的濁度達1.5×108cfu/mL(0.5號管)，備用。

　　1.4.2 體外抑菌試驗--管碟法

　　向MH(A)瓊脂平板培養基中加入200uL菌液，用滅菌L棒把菌液涂抹均勻，放置2min后放入滅菌牛津杯，每個平皿放4個，放置10min。黃連解毒散與白頭翁散提取液各加2孔，同法制備的藥液加在同一平皿上，細粉及超細微粉提取液各做4個重復。培養皿置37℃溫箱培養16小時，游標卡尺測量抑菌圈直徑大小。

　　2 數據處理與結果分析

　　采用統計學軟件SPSS 13.0進行樣本均數差異的顯著性檢驗。

　　黃連解毒散、白頭翁湯抑菌試驗結果見表1，表2。黃連解毒散兩種粉末經過水提、醇提后，抑菌圈大小存在顯著差異(p<0.05)。但是，其對臨床分離菌株XX、NC、沙門氏菌株S-XM未測定出抑菌效果。白頭翁湯兩種粉末經過水提、醇提后，除了大腸桿菌LYG外，對其它幾個菌株抑菌圈大小也存在顯著差異(p<0.05)。同時，其對臨床分離菌株XX、NC未測定出抑菌效果。

表1  黃連解毒散抑菌試驗結果（，mm）

菌種	超微粉			細粉
	水提液	醇提液		水提液	醇提液
金黃色葡萄球菌ATCC25923	10.01±0.240*	11.59±0.472*		9.118±0.279	10.07±0.216
大腸桿菌 ATCC25922	10.99±0.660*	11.12±0.306*		9.183±0.496	9.575±0.253
大腸桿菌LYG	9.302±0.308*	10.60±0.227*		8.455±0.201	9.060±0.363
大腸桿菌XX	—	—		—	—
大腸桿菌NC	—	—		—	—
沙門氏菌S-XM	—	—		—	—

注：*表示超微分與細粉水提液和醇提液的抑菌圈比較差異顯著（p<0.05）；—表示未測出抑菌圈

表2  白頭翁湯抑菌試驗結果（，mm）

菌種	超微粉			細粉
	水提液	醇提液		水提液	醇提液
金黃色葡萄球菌ATCC25923	10.17±0.451*	12.01±0.741*		8.808±0.182	10.74±0.512
大腸桿菌 ATCC25922	11.57±0.772*	11.15±0.395*		8.980±0.496	9.928±0.279
大腸桿菌LYG	10.31±0.324	10.65±0.559		9.404±0.354	9.856±0.343
大腸桿菌XX	—	—		—	—
大腸桿菌NC	—	—		—	—
沙門氏菌S-XM	12.24±0.423*	12.97±0.398*		10.63±0.410	10.76±0.556

注：*表示超微分與細粉水提液和醇提液的抑菌圈比較差異顯著（p<0.05）；—表示未測出抑菌圈

　　3 討論

　　本次試驗中，我們對黃連解毒散、白頭翁湯超細微粉和細粉進行的體外抑菌試驗結果表明，經兩種不同方法提取后，其對大部分菌株的抑菌圈大小都存在著顯著差異(P<0.05)。說明利用超微粉碎技術對中藥方劑進行超微粉碎，可以大大提高有效成分的體外溶出度，使其體外抑菌效果明顯提高，為其臨床應用提供了科學依據。此外，我們也使用了臨床分離的禽大腸桿菌和沙門氏菌菌株進行試驗，除白頭翁湯對沙門氏菌S-XM有抑菌作用外，上述兩藥對其它的臨床分離菌抑菌效果都不佳。這與趙國榮[7]、祝國強[8]的研究結果基本一致，具體原因還需要在以后的研究中進一步探討。

　　超微粉技術目前還主要應用于一些貴重藥材及一些來源稀少、價格昂貴的保健滋補中藥上，由于缺少嚴格的質量檢測標準，因此還沒有完全應用于市場。但是，中草藥無論固體型劑或液體型劑在獸醫臨床中占著重要位置[9]。動物群體用藥或飼料添加劑，大多數以散劑為主，使用方便、省時、省力、減少不良應激。尤其禽類飼用(投服)中草藥散劑，因為沒有咀嚼功能，腸道短，排泄快，藥物進入胃腸未等溶出或溶出不全就被排出體外，當然降低效果，影響療效。中藥材經超微粉碎后，細胞破壁，中藥有效成分的釋放量大幅度提高，增加了其體外溶出度[10]。此外，在超微粉碎過程中，經控制可不產生過熱現象，甚至可在低溫下進行，并且粉碎速度快，有利于保留中藥材中不耐高溫的生物活性物質及各種營養成分，從而可大大提高藥效，降低用藥量，節約成本。

　　超微粉碎技術在中藥生產上雖己顯露出其特有的優勢，但超微粉碎技術也不是萬能的。研究表明，超微粉碎應用于中藥的粉碎時，也存在一定的應用規律和應用條件等科學問題，而不是一個簡單的粉碎過程。首先，并不是所有的藥材都適合用采用超微粉碎，例如含淀粉、黏液質較多的藥材，如果采用超微粉碎，細胞破壁高，這些無效成分也會因大量暴露而被釋放出來，嚴重影響其他成分的釋放并且可能阻礙有效成分的吸收[11]。含芳香性、揮發性成分的藥材，破壁率高有利于有效成分的釋放和吸收，但在粉碎的同時，揮發性物質的揮發損失也不容忽視[12]。本次試驗結果，我們發現，上述兩個復方中藥提取液對某些細菌菌株在開始培養階段能產生一定大小的抑菌圈，但在培養過一定時間后，牛津杯周圍又開始有細菌生長，最后抑菌圈消失。我們懷疑可能就是藥物粉碎后提取，其中的有效成分和無效成分都被釋放，一些無效成分可能對細菌生長有促進作用，具體還需要在以后的工作用進一步探討。其次，超微細粉的分級也是值得深入探討的問題。目前大部分超微粉分出率較低，分級不及時導致細粉過多消耗大量機械能，使設備運行耗能大，導致整個系統效率低下，如何采用多級超微粉分級技術是實現超微粉精細分級和降低耗能的有效手段。中藥經超微粉碎后，由于粒徑的減小容易導致表面能增加，使顆粒處于不穩定狀態;流動性差，易聚集形成假大顆粒;可濕性增加，易吸潮;吸附性增加，易吸附空氣中的雜質，這些都不利于微粉中藥及其制劑的過篩、保存、運輸等。

　　為此，我們還需要進行超微粉碎的工藝流程、條件、生產設備等方面的研究，對于其中一些綜合性強的技術問題，必須與其它技術或工程措施相結合，方能充分發揮超微粉碎的優勢性，使其在獸藥生產中得到廣泛的應用。

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